Cria-se "mini-genes" para diagnosticar e prevenir o câncer de mama e ovário hereditários

CSI/CGP/DICYT Uma equipe de cientistas do Instituto de Biologia e Genética Molecular (IBGM), centro misto CSIC-Universidade de Valladolid, desenvolveu e patenteou uma nova ferramenta para realizar ensaios funcionais de processamento do RNA mensageiro ou splicing, uma etapa essencial da expressão gênica em células eucariotas. Estes ensaios ex vivo ajudarão a identificar mutações de splicing de genes causantes do câncer de mama e ovário hereditários.

O splicing consiste na eliminação precisa dos íntrons (sequencia não-codificante) do RNA mensageiro precursor, e na união sequencial dos éxons (as regiões de um gene que codificam proteína), ensejandi o RNA mensageiro maduro. Uma alta proporção das mutações que causam doenças genéticas está associada a anomalias no splicing dos genes responsáveis.

Os pesquisadores desenvolveram uma ferramenta, o vetor de splicing pSAD (siglas em inglês de Splicing and disease), para a criação de mini-genes híbridos (uma versão simplificada e artificial de um gene) de quase todos os éxons de BRCA1 e BRCA2, os dois principais genes de predisposição ao câncer de mama. O trabalho permitirá estudar o efeito de qualquer mutação sobre o splicing, sem necessidade de uma amostra de RNA do paciente.

A equipe de cientistas demonstrou que mais de um terço das mutações patogênicas afetam o processamento do pré RNA mensageiro. “A identificação de alterações dos padrões de splicing em BRCA1 e BRCA2 fornecerá uma informação essencial para esclarecer o espectro de suscetibilidade genética a câncer de mama e ovário”, indica Eladio Velasco, pesquisador do CSIC no IBGM.

De acordo com o pesquisador do IBGM, no rastreamento de mutações de BRCA1 e BRCA2 dentro dos programas de prevenção do câncer hereditário, até 15% das pacientes apresentam variantes de DNA de significado clínico desconhecido, isso é, não sabem se são patogênicas ou neutras, e sua classificação é tremendamente complicada. “Nós oferecemos a possibilidade de classifica-las do ponto de vista do splicing. A classificação de uma variante de DNA como mutação patogênica de splicing permite aumentar as famílias que se beneficiam dos protocolos de prevenção”, explica.

A equipe dirigida por Velasco mostrou que mais de um terço das mutações patogênicas afetam o processamento do pré RNA mensageiro. “A identificação de alterações dos padrões de splicing nos BRCA1 e BRCA2 e em outros genes de predisposição fornecerá uma informação essencial para esclarecer o espectro de suscetibilidade genética ao câncer de mama”, indica o pesquisador do IBGM.

O pSAD foi utilizado na construção de um mini-gene de BRCA2, em colaboração com o Hospital Clínico San Carlos de Madrid. O IBGM de Valladolid colocará em breve a disposição um serviço baseado nestes mini-genes em colaboração com a empresa AC‐Gen Reading Life.

Transferência de resultados

O desenvolvimento da patente faz parte da tese doutoral do pesquisador Alberto Acedo, que também é um dos promotores da empresa de base tecnológica AC-Gen Reading Life, localizada no Parque Científico Universidade de Valladolid (PCUVa). A empresa, dedicada a aplicação do sequenciamento massivo ao estudo de genes de doenças hereditárias, tem o objetivo de ajudar na prevenção e diagnóstico destas doenças e poderá completar seus serviços com este novo desenvolvimento.

“Alguns autores estimam que 60% das variantes de DNA detectadas nos pacientes poderiam afetar o processo de splicing, e muitas delas estão relacionadas com uma patogenicidade importante. Quando fazemos um diagnóstico o resultado pode ser negativo, positivo ou incerto, nesses resultados incertos a ferramenta que desenvolvemos será fundamental. Nossa empresa se dedica ao sequenciamento massivo e detectamos um grande número de variantes de significado incerto, de modo que a ferramenta nos permitirá completar estes estudos”, detalha à DiCYT Alberto Acedo, que defendeu recentemente sua tese doutoral.

O objetivo agora é que a empresa obtenha a licença da patente e possa oferecer o serviço, denominado Avaliação de variantes de DNA de efeito clínico desconhecido. Acedo se mostra confiante em obter a licença antes do final do ano e começar o serviço imediatamente, considerando que a técnica, em colaboração com o CSIC, já está ajustada.

BRCA1 e BRCA2

O primeiro gene em que se identificaram mutações germinais responsáveis pelo câncer de mama e ovário hereditários foi o BRCA1 em 1994. Os BRCA1 e BRCA2 são responsáveis por 20% do câncer de mama hereditário e apresentam mais de 3.500 variantes de DNA distintas. A ambos é atribuída uma função geral de manutenção da integridade genômica e reparação do dano no DNA.

Uma mulher portadora de uma mutação em qualquer dos genes tem 85% de risco de desenvolver câncer de mama aos 70 anos, em comparação com 7% da população geral. Estas mutações também aumentam o risco de outros tipos de tumor como o de próstata ou pâncreas.

Em um trabalho publicado recentemente na revista Carcinogenesis, os cientistas indagam a origem de uma mutação recorrente do BRCA2, a c.2808_2811del, que possui uma alta prevalência na Espanha, é a mais frequente em Castela e Leão e a segunda mais relatada nas bases de dados internacionais. Os cientistas consideram que a mutação c.2808_2811del foi gerada em três eventos históricos distintos, dos quais dois apareceram na época dos visigodos (anos 600 e 700).

Referências bibliográficas

Mar Infante, Mercedes Durán, Alberto Acedo, Eva María Sánchez‐Tapia, Beatriz Díez‐Gómez,Alicia Barroso, María García‐González, Lídia Feliubadaló, Adriana Lasa, Miguel de a Hoya, Eva Esteban‐ Cardeñosa, Orland Díez, Cristina MartínezBouzas, Javier Godino, Alexandre Teulé, Ana Osorio, Enrique Lastra, Rogelio GonzálezSarmento, Cristina Miner e Eladio A. Velasco. "The highly prevalent BRCA2 mutation c.2808_2811del (3036delACAA) is located in a mutational hotspot and has multiple origins". Carcinogenesis. DOI: http://dx.doi.org/10.1093/carcin/bgt272.

Gorka Ruiz de Garibay, Alberto Acedo, Zaida García‐Casado, Sara Gutiérrez‐Enríquez, Alicia Tosar, Atocha Romero, Pilar Garre, Gemma Llort, Mads Thomassen, Orland Díez, Pedro Pérez‐Segura, Eduardo Díaz‐Rubio, Eladio A. Velasco, Trinidade Caldés, Miguel de a Hoya. "Capillary Electrophoresis analysis of Conventional Splicing Assays: IARC Analytical and Clinical Classification of 31 BRCA2 genetic variants". Human Mutation, DOI: 10.1002/humu.22456.